Realtime PCR là một phương pháp quan trọng trong sinh học phân tử. Sử dụng PCR, các trình tự cụ thể trong khuôn mẫu DNA hoặc cDNA có thể được sao chép hoặc “khuếch đại” lên hàng nghìn đến hàng triệu lần bằng cách sử dụng oligonucleotide đặc hiệu trình tự, DNA polymerase chịu nhiệt và chu kỳ nhiệt. Trong PCR truyền thống (điểm cuối), việc phát hiện và định lượng trình tự được khuếch đại được thực hiện vào cuối phản ứng sau chu kỳ PCR cuối cùng và bao gồm phân tích sau PCR như điện di gel và phân tích hình ảnh. Trong PCR định lượng thời gian thực, sản phẩm PCR được đo ở mỗi chu kỳ. Bằng cách theo dõi các phản ứng trong giai đoạn khuếch đại theo cấp số nhân của phản ứng, người dùng có thể xác định số lượng mục tiêu ban đầu với độ chính xác cao.

Ưu điểm của Realtime PCR bao gồm:
• Khả năng theo dõi tiến trình phản ứng PCR khi nó diễn ra theo thời gian thực
• Khả năng đo chính xác lượng amplicon ở mỗi chu kỳ, cho phép định lượng chính xác lượng vật liệu ban đầu trong mẫu
• Phạm vi phát hiện động tăng lên
• Quá trình khuếch đại và phát hiện diễn ra trong một ống duy nhất, loại bỏ các thao tác sau PCR